Ripasudil自由基地

常用名：Ripasudil自由基地

CAS号：223645-67-8

英文名：K-115 (free base)

中文别名：N/A

Ripasudil自由基地名称

中文名：Ripasudil自由基地
英文名：4-fluoro-5-[[(2S)-2-methyl-1,4-diazepan-1-yl]sulfonyl]isoquinoline
英文别名：更多

Ripasudil自由基地生物活性

描述：Ripasudilfreebase(K-115freebase)是ROCK特异性抑制剂,能够抑制ROCK2和ROCK1的活性,IC50值分别为19和51nM。
相关类别：信号通路>>细胞周期/DNA损伤>>岩石信号通路>>干细胞及Wnt通路>>岩石信号通路>>TGF-beta/Smad信号通路>>岩石研究领域>>神经疾病
靶点：

ROCK2:19nM(IC50)

ROCK1:51nM(IC50)

CaMKIIa:370nM(IC50)

PKACa:2.1μM(IC50)

PKC:27μM(IC50)

体外研究：Ripasudil(K-115)是ROCK的有效抑制剂,ROCK2和ROCK1的IC50分别为19和51nM。Ripasudil对CaMKIIα,PKACα和PKC的抑制活性也较低,IC50分别为370nM,2.1μM和27μM[1]。Ripasudil(K-115;1,10μM)诱导细胞骨架变化,包括回缩和细胞变圆以及培养的小梁网(TM)细胞的肌动蛋白束减少。Ripasudil(5μM)显着降低经内皮电阻(TEER),并增加Schlemm管内皮细胞(SCE)单层细胞的FITC-葡聚糖渗透性[2]。
体内研究：Ripasudil(K-115)以浓度依赖性方式降低眼内压(IOP),在猴眼中浓度为0.1％至0.4％,在兔眼中浓度为0.0625％至0.5％[1]。Ripasudil(K-115;1mg/kg,每日口服)显示神经压迫(NC)后视网膜神经节细胞(RGC)的神经保护作用。Ripasudil还抑制小鼠轴突损伤诱导的氧化应激。Ripasudil抑制NC损伤后RGC中ROS的时间依赖性产生[3]。
激酶实验：将ROCK1（0.75ng/mL）和ROCK2（0.5ng/mL）与各种浓度的Ripasudil，Y-27632或HA-1077在25°C下在50mMTris-HCl缓冲液（pH7.5）中孵育90分钟）含有100mMKCl，10mMMgCl2,0.1mMEGTA，30mM长S6激酶底物肽和1mMATP，总体积为40mL。PKACa，PKC和CaMKIIa也与各种浓度的Ripasudil，Y-27632或HA-1077一起温育。将PKACa（0.0625ng/mL）在含有20mMMgCl2,1mg/mLBSA，5mMKemptide肽底物和1mMATP的40mMTris-HCl缓冲液（pH7.5）中于25°C孵育30分钟总体积为40mL。将PKC（0.025ng/mL）在含有20mMMgCl2,0.4mMCaCl2,0.1mg/mLBSA，0.25mMEGTA，25ng/mL的20mMTris-HCl缓冲液（pH7.5）中于25°C孵育80分钟磷脂酰丝氨酸，2.5ng/mL二酰基甘油，0.0075％Triton-X-100,25mMDTT，10mMNeurogranin（28-43）肽底物和1mMATP，总体积为40mL。将CaMKIIa（0.025ng/mL）在含有10mMMgCl2,2mMCaCl2,0.04mg/mLBSA，16mg/mL纯化钙调蛋白的50mMTris-HCl缓冲液（pH7.5）中于25°C孵育90分钟睾丸，500mMDTT，50mMAutocamitide2和1mMATP，总体积为40mL。孵育后，加入40mLKinaseGlo发光激酶测定溶液，并使其在25℃保持10分钟，并使用发光计测量相对光单位（RLU）。不含试验化合物的RLU设定为100％（对照值），不含酶和化合物的RLU设定为0％（正常值）。然后通过添加每种浓度的测试化合物从RLU计算反应速率（对照的％），并且使用SAS[1]通过逻辑回归分析确定50％抑制浓度（IC50）。
细胞实验：将小梁网细胞（TM）细胞以每孔1×104个细胞的密度接种在6孔板上，在含有10％FBS的DMEM中。在过夜培养后，当细胞达到半流量时，将1或10μMRipasudil，10μMY-27632或10μM法舒地尔加入培养孔中。PBS用作对照载体。60分钟后，除去药物溶液并用含有10％FBS的DMEM代替。通过相差显微镜观察细胞，并在药物施用后60分钟和药物去除后2小时拍照。对于免疫组织化学，将TM细胞以每孔1×104个细胞的密度接种在明胶包被的8孔室载玻片上，在含有10％FBS的DMEM中。在过夜培养后，当细胞达到半流量时，将细胞在1或10μM的Ripasudil，10μM的Y-27632或10μM的法舒地尔孵育60分钟。PBS用作对照载体。取出药物溶液并在2小时后用含有10％FBS的DMEM替换。将细胞用PBS中的4％多聚甲醛固定15分钟，然后用细胞骨架缓冲液（10mMMES，150mMNaCl，5mMEGTA，5mMMgCl2,5mM葡萄糖，pH6.1）和血清缓冲液（PBS中10％FBS）洗涤。）。细胞用PBS中的0.5％TritonX-100在室温下透化12分钟，并在4℃下用血清缓冲液封闭至少2小时。丝状肌动蛋白（F-肌动蛋白）在室温下用0.05mg/mL鬼笔环肽-TRITC标记1小时。用PBS洗涤后，用含有DAPI的商业封固剂固定细胞，并用荧光显微镜观察。拍摄F-肌动蛋白和DAPI图像的曝光分别为0.1和0.05秒[2]。
动物实验：兔子[1]在兔子实验中，将50mL浓度为0.0625％，0.125％，0.25或0.5％的载体或瑞帕司他滴入一只眼睛中。在滴注前和滴注后0.5,1,2,3,4和5小时测量双眼的眼压（IOP）。对侧眼未治疗。给动物施用使用拉丁方法指定的所有浓度的Ripasudil，间隔至少2天。猴子[1]在猴子实验中，将20mL浓度为0.1％，0.2％或0.4％的Ripasudil和浓度为0.005％的拉坦前列素滴注到一只眼睛中。在滴注前和滴注后1,2,4,6和8小时测量双眼的IOP。对侧眼未治疗。使用拉丁方法将动物安排接受所有制剂，间隔至少1周。将IOP与给药前和滴注瑞帕司他后的每个时间点的滴注侧的结果进行比较，并在每个时间点与双眼进行比较。
参考文献：

[1].IsobeT,etal.EffectsofK-115,arho-kinaseinhibitor,onaqueoushumordynamicsinrabbits.CurrEyeRes.2014Aug;39(8):813-22.

[2].KanekoY,etal.EffectsofK-115(Ripasudil),anovelROCKinhibitor,ontrabecularmeshworkandSchlemm’scanalendothelialcells.SciRep.2016Jan19;6:19640.

[3].YamamotoK,etal.ThenovelRhokinase(ROCK)inhibitorK-115:anewcandidatedrugforneuroprotectivetreatmentinglaucoma.InvestOphthalmolVisSci.2014Oct2;55(11):7126-36.

Ripasudil自由基地物理化学性质

密度：1.3±0.1g/cm3
沸点：497.2±55.0°Cat760mmHg
分子式：C15H18FN3O2S
分子量：323.386
闪点：254.5±31.5°C
精确质量：323.110382
PSA：70.68000
LogP：1.72
蒸汽压：0.0±1.3mmHgat25°C
折射率：1.589
储存条件：2-8℃

Ripasudil自由基地英文别名

：Isoquinoline,4-fluoro-5-(((2S)-hexahydro-2-methyl-1H-1,4-diazepin-1-yl)sulfonyl)
：4-Fluoro-5-{[(2S)-2-methyl-1,4-diazepan-1-yl]sulfonyl}isoquinoline
：Ripasudil[INN]
：Isoquinoline,4-fluoro-5-[[(2S)-hexahydro-2-methyl-1H-1,4-diazepin-1-yl]sulfonyl]-
：1H-1,4-Diazepine,1-((4-fluoro-5-isoquinolinyl)sulfonyl)hexahydro-2-methyl-,(2S)
：Ripasudil
：K-115(freebase)